Streptavidin을 사용한 현장 카지노 커뮤니티 화 (ISH) 신호의 검출

제안 된 화학 물질 : Detek – Hrp 키트, Enzo Diagnostics Cat. No. 43820.

1. 2 X SSC 솔루션에 카지노 커뮤니티를 담그고 덮개 슬립이 카지노 커뮤니티에서 떨어지게하여 덮개 슬립을 제거합니다.
2. 다음 카지노 커뮤니티 화 혼합물을 준비하십시오. 10 ㎕의 카지노 커뮤니티 화 믹스는 한 슬라이드에 사용되며 '18 x 18 '커버 슬립으로 덮여있다.

2 x SSC는 5 분 동안 실온에서

37 ° C에서 10 분 동안 2 x SSC,

5 분 동안 실온에서 2 x SSC,

1 x PBS 5 Mi

1. 세척 중에 탐지 소울 션 (양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 공유 스트렙 타비 딘) 준비 : 900 µL H를 혼합하십시오.₂O 100 µl 10 x 버퍼와 함께 O를 넣은 다음 Streptavidin 용액 3-10 µl (10 카지노 커뮤니티)를 추가하십시오..
2. 1 x PBS 세척 후 종이 타월의 카지노 커뮤니티를 배출 (그러나 절대로 건조하지 않음).
3. 각 슬라이드에 100 ㎕의 감지 솔루션을 바르고 '22 x 22 'mm 커버 슬립으로 덮으십시오. 그런 다음 카지노 커뮤니티 화 단계에 사용 된 동일한 습한 챔버에 슬라이드를 놓고 37 ℃에서 30 분 동안 배양합니다.
• 0.05% DAB (Diaminobenzidine Tetrahydrochloride) 용액은 10 개의 카지노 커뮤니티에 대해 10 ml 1 x PBS에서 5 mg dab입니다. 주의 : DAB는 위험한 발암 물입니다.
• 2 % Giemsa 솔루션은 200ml H의 4ml 스톡 Giemsa 솔루션입니다.₂O.
4. 카지노 커뮤니티를 1 x PBS를 포함하는 비이커에 기울이거나 담그면 덮개 슬립을 제거합니다.
5. 5 분 동안 실온에서 1 x PBS로 카지노 커뮤니티를 씻으십시오.
6. 마지막 1 x PBS 세척 중에 4 μL H를 추가하십시오.₂O₂(과산화수소) 10-ml 0.05% DAB 용액으로 잘 섞습니다.
7. 마지막 1 x PBS 세척 후 종이 타월에 카지노 커뮤니티를 배수하고 0.05% DAP/H 1ml를 바르십시오.₂O₂각 카지노 커뮤니티에.커버 슬립으로 덮지 마십시오.10 분 동안 실온에서 어둠 속에서 카지노 커뮤니티를 인큐베이션합니다.
8. 0.05% DAP/H 제거₂O₂종이 타월에 카지노 커뮤니티를 기울여서 1 x pbs로 카지노 커뮤니티를 짧게 헹구어 솔루션. 2% Giemsa 용액에 카지노 커뮤니티를 2 분 동안 염색합니다.
9. 수돗물로 카지노 커뮤니티를 헹구고 핸드 퍼프로 건조시킵니다 (Giemsa 염색이 너무 어두워지면 카지노 커뮤니티가 다시 헹굼 될 수 있습니다). 혼성화 신호는 색상이 짙은 갈색으로 밝게 보이는 반면, 염색체는 파란색을 염색합니다.