단일 식민지에서 Kaput 튜브에서 2ml 배양을 접종하여 밤새 37 ° C 셰이커에 넣습니다.
꽁 머니 카지노크에 2ml 전두를 쏟아서 1 L 꽁 머니 카지노크에서 400ml 배양을 접종하고; 흔들리는 동안 37 ° C에서 4 ~ 5 시간 인큐베이션을 허용합니다.
4 ° C에서 6,000 rpm에서 10 분 동안 원심 꽁 머니 카지노하여 세포를 수확합니다. 상청액을 데우고 얼음 위의 각도로 놓아 나머지 액체가 펠렛에서 멀어지게합니다.
용액 I (50 mM 포도당, 25 mM 트리스 pH 8.0, 10 mM EDTA)에 펠렛을 재현 펜트; 배양을 50ml Nalgene Polyallomer 원심 꽁 머니 카지노 튜브로 옮깁니다.
10 ml의 용액 II (O.2 N NaOH, 1 % SDS), 파라 필름이있는 덮개 튜브를 추가하고 부드럽게 반복하여 반복적으로 혼합; 솔루션을 10 분 동안 얼음 위에 놓을 수 있도록하십시오.
7.5 ml의 용액 III (3 M NAAC pH 4.8), 파라 필름이있는 덮개 튜브를 추가하고 부드럽게 뒤집어 섞어
4 ° C에서 15 분 동안 12,000 rpm에서 원심 꽁 머니 카지노기 튜브를, 상청액을 두 번째 50-ml 튜브에 붓고, 11ml 이소프로판올에 첨가하고, 파라 필름으로 덮고, 4 ° C에서 5,000 rpm에서 5 분 동안 부드럽게 원심 꽁 머니 카지노 튜브를 섞어서, 70% ethanol, rinse rinse. 튜브가 10 분 동안 배수되도록하고, 근처 건조로 리프 폴 화;
TE에서 4.7 g의 CCCL 및 0.4 ml의 10 mg/ml 에티 디움 브로마이드 용액을 추가하고 (샘플의 밀도는 1.55 내지 1.59 g/ml 사이의 샘플의 밀도는 조정하기 위해 TE 또는 CSCL을 첨가한다; CSCL이없는 꽁 머니 카지노 DNA도 생체-라벨링에 사용될 수있다. 사용된).
솔루션을 Beckman '13 x51 '폴리 알 로머 퀵 슬리트 튜브로 트랜퍼하고 목 바로 아래로 채워집니다 (튜브의 무게는 9.45-9.6 g) 및 밀봉.
4 시간 동안 65,000 rpm에서 20 ° C에서 원심 꽁 머니 카지노기 튜브 또는 밤새 55,000 rpm.
바늘과 주사기로 튜브에서 꽁 머니 카지노 밴드를 제거하고 1.5ml 튜브로 옮깁니다.
1 부피의 포화 이소프로판올 (동일한 부피의 이소프로판올과 20 x SSC pH 7.0을 혼합)을 추가하고 잘 혼합하십시오. 원심 꽁 머니 카지노 또는 몇 분 동안 서있게하십시오.
추출을 4-5 배 또는 프로판올의 분홍색이 사라질 때까지 반복합니다.
2 부피의 TE로 DNA 샘플을 희석하고 1/10 부피의 3M NAAC pH 7을 추가하고 잘 혼합하십시오.
95%의 95% 에탄올을 추가하고 잘 섞으십시오.
5 분 동안 원심 꽁 머니 카지노, 배수관, 튜브의 펠렛과 측면을 70% 에탄올로 헹구고 에탄올을 배출하고 펠렛을 말리십시오.
DNA를 400 ㎕ TE에 녹이고 20 μL RNase A (10 mg/ml)를 첨가하고 믹스하고 15 분 동안 실온에서 배양합니다..
1 : 1 페놀 : 클로로포름 용액의 동일한 부피를 추가하고, 잘 혼합하고, 간단히 원심 꽁 머니 카지노 한 후, 상부 위상을 다른 튜브로 옮깁니다.
동일한 양의 클로로포름을 추가하고 잘 섞어서 원심 꽁 머니 카지노 한 다음 상단 위상을 다른 튜브로 옮깁니다.
3 M NAAC 및 에탄올로 DNA를 침전시키고 펠렛을 400 μL TE에 용해시킵니다..